PRÁTICA EXPERIMENTAL - EXTRAÇÃO DO DNA DO MORANGO

Roteiro Experimental: Extração de DNA do Morango

Objetivo:
Demonstrar a técnica de extração de DNA de células vegetais, utilizando o morango como material biológico. O procedimento é simples, utilizando reagentes caseiros para que os alunos possam visualizar o DNA.

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Material Necessário:

1. Meio biológico:

   • 1 morango maduro

2. Reagentes:

   • 10 mL de detergente neutro (detergente de louça)
   • 1 colher de chá de sal de cozinha (NaCl)
   • 90 mL de água destilada
   • 10 mL de álcool gelado (70% ou 90% de etanol ou isopropanol)

3. Equipamentos:

   • 1 saco plástico tipo ziplock
   • 1 copo de vidro
   • 1 filtro de café ou gaze
   • 1 funil
   • 1 bastão de vidro ou palito de madeira (para recolher o DNA)

4. Outros:

   • 1 colher
   • Conta-gotas ou pipeta

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Procedimento Experimental:

1. Preparação da solução de extração:

   • Em um copo, misture 90 mL de água destilada com 10 mL de detergente e a colher de chá de sal. Mexa a solução até que o sal esteja completamente dissolvido.

2. Maceração do morango:

   • Remova o talo do morango e coloque-o no saco plástico ziplock. Com o morango dentro do saco, amasse-o gentilmente com as mãos até que se torne uma polpa líquida. Isso rompe as paredes celulares e facilita o acesso ao DNA.

3. Adição da solução de extração:

   • Adicione 10 mL da solução de extração (detergente + sal + água) no saco com a polpa de morango. Amasse e misture novamente por cerca de 2 minutos. O detergente irá quebrar as membranas celulares e nucleares, liberando o DNA das células. O sal ajuda a neutralizar as cargas negativas do DNA, facilitando sua precipitação.

4. Filtragem da mistura:

   • Coloque o funil sobre o copo e insira o filtro de café ou a gaze no funil. Despeje a mistura do saco no funil, filtrando os resíduos sólidos e deixando apenas o líquido filtrado no copo.

5. Precipitação do DNA:

   • Adicione lentamente o álcool gelado (etanol ou isopropanol) no líquido filtrado, despejando-o pela lateral do copo, criando uma camada por cima do líquido. O álcool deve estar bem gelado, pois isso facilita a precipitação do DNA, que aparecerá como uma substância esbranquiçada e fibrosa entre as duas camadas (álcool e solução).

6. Recolhimento do DNA:

   • Use o bastão de vidro ou um palito de madeira para enrolar o DNA que está se precipitando. Ele se agrupará como uma massa visível de filamentos.

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Explicação Teórica:

1. Estrutura do Morango:

   • O morango é um organismo multicelular com células que possuem parede celular, membrana plasmática, núcleo e outras organelas. Como o morango é um organismo poliploide, contendo múltiplas cópias de cada cromossomo, ele oferece uma alta concentração de DNA, o que facilita a extração.

2. Função dos Reagentes:

   • Detergente: Serve para romper a membrana plasmática e as membranas nucleares, que são feitas de lipídios. Isso permite a liberação do DNA que está no núcleo.
   • Sal: O sal ajuda a neutralizar as cargas negativas da molécula de DNA (devido aos grupos fosfato na sua estrutura). Isso torna o DNA menos solúvel em água, facilitando sua precipitação.
   • Álcool gelado: O DNA não é solúvel em álcool, especialmente em temperaturas baixas. Quando o álcool é adicionado à solução, o DNA se separa da mistura e se torna visível.

3. Filtragem:

   • A filtragem remove pedaços grandes de células, como restos de parede celular e organelas, permitindo que o DNA e outras moléculas menores passem pelo filtro.

4. Precipitação do DNA:

   • O DNA precipita-se no contato com o álcool porque as moléculas de álcool interrompem as interações entre o DNA e a água. Como o DNA é uma molécula longa e fibrosa, ele começa a se aglomerar, tornando-se visível a olho nu.

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Referências Teóricas:

• Estrutura do DNA: O DNA (ácido desoxirribonucleico) é formado por uma dupla hélice de nucleotídeos. Cada nucleotídeo é composto por uma base nitrogenada (adenina, timina, citosina ou guanina), um grupo fosfato e uma molécula de desoxirribose. Nos organismos vivos, o DNA carrega a informação genética que orienta o desenvolvimento e a função celular.

• Processo de Extração de DNA: A extração de DNA envolve o rompimento das membranas celulares e nucleares para liberar o DNA, seguido de sua purificação e precipitação. Em biotecnologia e biologia molecular, essa técnica é usada para estudos genéticos, clonagem e outros experimentos.

• Aplicações Científicas: Técnicas de extração de DNA são amplamente utilizadas em pesquisa genética, diagnóstico médico, biotecnologia e investigações forenses.

Esse experimento é uma demonstração prática de como o DNA pode ser isolado de tecidos biológicos, utilizando reagentes simples e acessíveis.